bitpie正版钱包|dtt是什么
作者： bitpie正版钱包
2024-03-07 18:22:17
DTT特性与保存及其在蛋白纯化和保存中的作用 - 实验方法 - 丁香通
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关键词： 蛋白 纯化 作用
来源： 互联网
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DTT( 二硫苏糖醇)是实验室常用的还原试剂，常被用于蛋白质保存以及蛋白二硫键的还原。DTT的入特点是极易被氧化，稳定性较差，一般DTT常保存于-20度中可以长达数年。
DTT是一种很强的还原剂，其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环(含二硫键)的构象稳定性。它的氧化还原电势在pH为7时为-0.33伏。
DTT特点与DDT的保存
DTT是一种常用还原剂，有抗氧化作用，进口分装。DTT和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT的刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近。但DTT价格略高一些。DTT粉末的一般保存条件：-20℃保存。1M DTT溶液可以在-20℃保存2年以上。
由于容易被空气氧化，因此DTT的稳定性较差;但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命。由于质子化的硫的亲核性较低，随着pH值的降低，DTT的有效还原性也随之降低;而Tris(2-carboxyethyl)phosphine HCl(TCEP盐酸盐)可以作为低pH值条件下DTT的替代品，而且也比DTT更为稳定。
应用：
DTT的用途之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验(如DNA在生物感应器中的固定)的效率;而在DNA溶液中加入DTT，反应一段时间后除去，就可以降低DNA的二聚化。
DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子 内或分子间二硫键。但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部(溶剂不可及)的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性(高温加热或加入变性剂，如6M 盐酸胍、8M 尿素或1% SDS)。反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。
DTT在蛋白纯化 和保存中的作用
我们知道Cys存在与许多蛋白中，且其中的-SH常作为活性中心发挥作用，或者，两个-SH连接成二硫键，是维持蛋白质高级构象重要桥梁。-SH具有很强的还原性，溶液被溶液中的溶解氧或其它氧化物氧化，从使蛋白失去活性。所以，在蛋白纯化 和保存时，在溶液中加入一定量的DTT，以免蛋白-SH被氧化而失活。但这里就有一个矛盾，DTT该加多少量，以使-SH保持还原状态，而使二硫键免遭还原?除了上述作用，DTT还有哪些方面可以起到作用?
我也曾听一高人说起过，以摩尔数计算，5-10倍的量来保护-SH。如果蛋白报存buffer中含有15%左右的甘油，对蛋白具有很好的稳定作用。补充一点：如果dtt和蛋白摩尔比例比例增大到1：100，DTT就能破坏2硫键了，这时对应的浓度一般在10mM左右，这个一般在做还原肽图的时候用到。
不过有些分子 内的二硫键由于空间位阻的作用，还原剂的量增加到很大也不能破坏。这时可能要配合尿素等变性剂才能彻底打断二硫键(如包涵体变性)
DTT在离子状态才有作用，在pH7-9.5的时候作用最强，pH降到3以下几无电离，因此可以通过降低pH至3以下来终止DTT作现在才知道DTT作用还受到pH的影响。提到尿素变性，要是蛋白存在分子 间或分子内二硫键，即使具有高浓度的尿素或盐酸胍，而没有DTT等还原剂，那是否也不能使蛋白完全变性(断裂二硫键)?
我记得有篇“从纯化到星辰”文章中提到“万金油”配方是这样的:
50mM Tris pH 7.9
0.5mM EDTA
50mM NaCl
5% glycerol
DTT断裂二硫键需要什么的条件?蛋白的二硫键断裂后，形态、功能等发生怎样的改变?
我不是专门搞生化的。只是知道点皮毛而已，就我了解的而言，western blot要得以进行，特别是抗体要和目的蛋白结合，一方面要使打开蛋白质的SS键，因为如果SS键不打开，很有可能抗体不能很好的识别特定的位点，就不能结合上去;另一方面还要用SDS-PAGE消除蛋白质分子内的各种非共价键，使蛋白质所带电荷和其分子量成正比，这样才能使蛋白质分离出来。
DTT在电泳中还有一个作用。过量DTT能打开多聚体内的二硫键，使呈各个单体状态，而在loading中去除DTT后，多聚体仍然保持原状态。因此两者对比可以分辨该蛋白是否含有多聚体形式。
结合我的实验，我做的是有关纤维素酶基因的克隆与表达。应用的是家蚕杆状病毒表达系统。
携带有纤维素酶基因片段的重组病毒构建好以后，将转染细胞所获得的达到一定滴度的重组病毒从皮下注射到家蚕体内。
家蚕血淋巴中是否能表达纤维素酶?这是我目前所研究的重点。难点以及疑惑：家蚕血淋巴在空气中容易被氧化，虽然低温下可保持短时间内不被黑化(即氧化)，但测酶活的时候需要经过50度反应30分钟这一步，所以我第一次做的时候由于没添加巯基乙醇或者DTT，所以溶液变黑了。
小结： 本文总结了DTT特点与DDT的保存、应用、DTT在蛋白纯化和保存中的作用。
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醇_百度百科 网页新闻贴吧知道网盘图片视频地图文库资讯采购百科百度首页登录注册进入词条全站搜索帮助首页秒懂百科特色百科知识专题加入百科百科团队权威合作下载百科APP个人中心二硫苏糖醇播报讨论上传视频化学物质收藏查看我的收藏0有用+10二硫苏糖醇（Dithiothreitol，简称为DTT）是一种小分子有机还原剂，化学式为C4H10O2S2。其还原状态下为线性分子，被氧化后变为包含二硫键的六元环状结构。二硫苏糖醇的名字衍生自苏糖（一种四碳单糖）。DTT的异构体为二硫赤糖醇（DTE），即DTT的C3-差向异构体。中文名二硫苏糖醇外文名dithiothreitol 别 名1,4-二硫苏糖醇化学式C4H10O2S2分子量154.251CAS登录号3483-12-3沸 点364.45 ℃密 度1.303 g/cm³外 观白色固体闪 点174.22 ℃目录1简介▪IUPAC名▪识 别▪性 质2还原性3应用4产品特点5参考文献简介播报编辑IUPAC名(2S,3S)-1,4-Bis-sulfanylbutane-2,3-diol别名 1,4-二硫苏糖醇、二硫代苏糖醇、Cleland试剂识 别CAS号 3483-12-3 [1],27565-41-9 [2]二硫苏糖醇 分子结构式PubChem 446094SMILES SC[C@@H](O)[C@H](O)CS性 质化学式 C4H10O2S2 [1-2]摩尔质量 154.253 g·mol−1外观 白色固体熔点 42-43 °C沸点 125-130 °C （2 mmHg压力下）在水中的溶解度 可溶若非注明，所有数据来自25 °C，100 kPa还原性播报编辑DTT是一种很强的还原剂，其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环（含二硫键）的构象稳定性。它的氧化还原电势在pH为7时为-0.33伏。二硫苏糖醇对一个典型的二硫键的还原是由两步连续的巯基-二硫键交换反应所组成：二硫苏糖醇其中，第一步反应所形成的中间态很不稳定，因为DTT上的第二个巯基趋向于与被氧化的硫原子连接，使中间态很快被转化为DTT的环状氧化结构，从而完成对二硫键的还原。DTT的还原力受pH值的影响，只在pH值大于7的情况下能够发挥还原作用。这是因为只有脱去质子的硫醇盐负离子（-S–）才具有反应活性，硫醇（-SH）则没有；而巯基的pKa一般为～8.3。应用播报编辑DTT的用途之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验（如DNA在生物感应器中的固定）的效率；而在DNA溶液中加入DTT，反应一段时间后除去，就可以降低DNA的二聚化。DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如6M 盐酸胍、8M 尿素或1% SDS）。反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。产品特点播报编辑由于容易被空气氧化，因此DTT的稳定性较差；但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命。由于质子化的硫的亲核性较低，随着pH值的降低，DTT的有效还原性也随之降低；而Tris(2-carboxyethyl)phosphine HCl（TCEP盐酸盐）可以作为低pH值条件下DTT的替代品，而且也比DTT更为稳定。参考文献播报编辑1.^ Merck Index, 11th Edition, 3382.Cleland WW. (1964) "Dithiothreitol, A New Protective Reagent for SH Groups", Biochemistry, 3, 480-482.Ruegg UT and Rudinger J. (1977) "Cleavage of disulfide bonds in proteins", Methods Enzymol., 47, 111.新手上路成长任务编辑入门编辑规则本人编辑我有疑问内容质疑在线客服官方贴吧意见反馈投诉建议举报不良信息未通过词条申诉投诉侵权信息封禁查询与解封©2024 Baidu 使用百度前必读 | 百科协议 | 隐私政策 | 百度百科合作平台 | 京ICP证030173号 京公网安备110000020000“非实验人员”的试剂科普 | 二硫苏糖醇（Dithiothreitol，DTT） - 知乎
“非实验人员”的试剂科普 | 二硫苏糖醇（Dithiothreitol，DTT） - 知乎切换模式写文章登录/注册“非实验人员”的试剂科普 | 二硫苏糖醇（Dithiothreitol，DTT）鸬鹚生物鸬鹚生物是一家专注于体外诊断试剂原材料研发生产的高科技企业。原创 非实验人员 鸬鹚生物 2023-08-18 17:49 发表于四川收录于合集3个#鸬鹚课堂作为一个遭不住实验室特殊气味的“非实验人员”却Baby(“被逼”）来写一些关于实验室常用试剂的微信推文一开始，连“吹嘘”对象都一脸懵还好，实验同事先帮我推荐了一个目标对象让我“小试牛刀”二硫苏糖醇（ Dithiothreitol ，简称为DTT）它是一种超强的还原剂可以帮助我们保护和还原蛋白质中的二硫键和半胱氨酸残基让我们的蛋白质活力十足！全名是二硫苏糖醇分子式是C4H10O2S2，分子量是154.25。它看起来是一种白色或淡黄色的固体，有点像糖粉，但是味道不太好闻。DTT的特别之处在于它的结构中有一个六元环其中包含一个二硫键这个二硫键可以和其他二硫键发生氧化还原反应，从而打开或保护它们。这个六元环结构也使得DTT很稳定，不容易被再次氧化。但是DTT也很容易被空气中的氧气氧化，所以要在-20℃下保存，不能暴露在空气或光线下。另外，DTT在pH为7时最有效，而在pH低于3时失效。1、还原巯基化DNA，提高DNA偶联反应的效率。2、还原蛋白质中的二硫键，使蛋白质变性或展开，便于抗体识别或电泳分离。3、保护蛋白质中的半胱氨酸残基，防止-SH被氧化而失活。4、还原其他含有二硫键或巯基的生物分子，如胰岛素、谷胱甘肽、辅酶A等。“不要问我具体的作用机制，“非实验人员”不配知道，也不懂”如有需要了解具体的我可给你和我们的专业人士“牵线搭桥”小编还被告知，需要提醒各位“看官”注意以下几点：根据不同的目的和条件，选择合适的DTT浓度和处理时间。一般来说，5-10倍摩尔数的DTT可以保护-SH，而1：100摩尔比例或10mM左右的DTT可以打开二硫键。如果要终止DTT的作用，可以通过降低pH至3以下或加入其他氧化剂来实现。避免与其他还原剂或氧化剂混合使用，以免影响DTT的效果或产生不良反应。避免与金属离子或金属螯合剂接触，以免影响DTT的稳定性或活性。避免长时间暴露在空气或光线下，以免加速DTT的氧化或分解。避免与皮肤或眼睛接触，以免引起刺激或过敏。最后我也没得啥好建议给大家只能说虽然以上文字点都不专业但该想让你知道的，该提醒的也已经到位不然我只有去再次“骚扰”专业人士后再来写篇推文回复“产品资料”，可查看下载鸬鹚生物2023年主推产品性能评测数据。回复“抗体定向偶联”，可查看下载微信推文《一起学习吧 | 抗体的定向偶联》的全部参考文献。END电话：1871669405715828656752座机： 02863196253公司网址：http://www.lucibio.com收录于合集 #鸬鹚课堂3上一篇 · 一起学习吧 | 比浊知识知多少编辑于 2023-08-21 10:53・IP 属地四川化学试剂科普赞同 81 条评论分享喜欢收藏申请
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- 搜狗百科DTT即DL-Dithiothreitol，中文名为二硫苏糖醇。分子式为C4H10O2S2，分子量为154.25，纯度>99%。 常用还原剂，有抗氧化作用，进口分装。DTT和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT的刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近。但DTT价格略高一些。产品来源：上海浩然生物技术有限公司 1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液 【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。 【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。网页微信知乎图片视频医疗汉语问问百科更多»登录帮助首页任务任务中心公益百科积分商城个人中心添加义项DTT是一个多义词，您可以选择查看以下义项（共2个义项）：生物技术回合式教学法DTT编辑词条添加义项同义词收藏分享分享到QQ空间新浪微博生物技术DTT即DL-Dithiothreitol，中文名为二硫苏糖醇。分子式为C4H10O2S2，分子量为154.25，纯度>99%。常用还原剂，有抗氧化作用，进口分装。DTT和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT的刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近。但DTT价格略高一些。产品来源：上海浩然生物技术有限公司1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。中文名二硫苏糖醇展开简称DTT展开分子式C4H10O2S2展开外文全称DL-Dithiothreitol展开词条标签：生物技术生物工程免责声明搜狗百科词条内容由用户共同创建和维护，不代表搜狗百科立场。如果您需要医学、法律、投资理财等专业领域的建议，我们强烈建议您独自对内容的可信性进行评估，并咨询相关专业人士。词条信息词条浏览：100977次最近更新：22.05.16编辑次数：20次创建者：稻草人突出贡献者：新手指引了解百科编辑规范用户体系商城兑换问题解答关于审核关于编辑关于创建常见问题意见反馈及投诉举报与质疑举报非法用户未通过申诉反馈侵权信息对外合作邮件合作任务领取官方微博微信公众号搜索词条编辑词条 收藏 查看我的收藏分享分享到QQ空间新浪微博投诉登录企业推广免责声明用户协议隐私政策编辑帮助意见反馈及投诉© SOGOU.COM 京ICP备11001839号-1 京公网安备110000020000DL-dithiothreitol (DTT) | 还原剂 | MCE
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DL-dithiothreitol
(Synonyms: DTT)
目录号: HY-15917
纯度: 98.70%
FAQs
Data Sheet
SDS
COA
产品使用指南
溶解度
摩尔计算器
动物溶解方案
DL-dithiothreitol (DTT) 是一种强还原剂；一旦被氧化，会形成带有内部二硫键的稳定六元环。
MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务
DL-dithiothreitol Chemical Structure
CAS No. : 3483-12-3
1. 客户无需承担相应的运输费用。
2. 同一机构（单位）同一产品试用装仅限申领一次，同一机构（单位）一年内
可免费申领三个不同产品的试用装。
3. 试用装只面向终端客户。
规格
价格
是否有货
数量
10 mM * 1 mL
in DMSO
￥500
In-stock
0
1
2
3
4
5
6
7
500 mg
￥300
In-stock
0
1
2
3
4
5
6
7
1 g
￥350
In-stock
0
1
2
3
4
5
6
7
5 g
￥850
In-stock
0
1
2
3
4
5
6
7
10 g
询价
50 g
询价
or
大包装询价
* Please select Quantity before adding items.
Customer Review
Other Forms of DL-dithiothreitol:
DL-dithiothreitol-d6
In-stock
L-Dithiothreitol
询价
DL-dithiothreitol-d10
询价
DL-dithiothreitol-d10-1
询价
DL-dithiothreitol 相关抗体
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MCE 顾客使用本产品发表的 10 篇科研文献
•EMBO Mol Med. 2022 May 25;e15373.
[Abstract]
•Cell Death Dis. 2024 Feb 20;15(2):154.
[Abstract]
•Cell Death Dis. 2022 Oct 8;13(10):860.
[Abstract]
•Cell Rep. 2023 Apr 14;42(4):112403.
[Abstract]
•Free Radic Biol Med. 2024 Jan 17:S0891-5849(24)00025-X.
[Abstract]
•Heliyon. 2024 Feb 23.
•bioRxiv. 2024 Jan 7.
•Research Square Preprint. 2023 Nov 3.
•STAR Protoc. 2023 Mar 17.
•Research Square Print. September 9th, 2022.
DL-dithiothreitol 相关产品
•同靶点产品:
•同靶点蛋白产品:
生物活性
纯度 & 产品资料
参考文献
生物活性
DL-dithiothreitol (DTT) is a reducing agent. DL-dithiothreitol forms a stable six-membered ring with an internal disulfide bond once oxidized.
体外研究(In Vitro)
DL-dithiothreitol 广泛用于生物化学工作，以减少二硫桥、保护生物分子、样品制备以及电泳分析 (SDS-PAGE) 前的蛋白质变性。
MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.
DL-dithiothreitol 相关抗体:
分子量
154.25
Formula
C4H10O2S2
CAS 号
3483-12-3
性状
固体
颜色
White to off-white
中文名称
DL-二硫苏糖醇
运输条件
Room temperature in continental US; may vary elsewhere.
储存方式
4°C, protect from light, stored under nitrogen
*In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light, stored under nitrogen)
溶解性数据
In Vitro:
H2O 中的溶解度 : ≥ 200 mg/mL (1296.60 mM)
DMSO 中的溶解度 : 100 mg/mL (648.30 mM; 超声助溶; 吸湿的 DMSO 对产品的溶解度有显著影响，请使用新开封的 DMSO)
* "≥" means soluble, but saturation unknown.
配制储备液
浓度
溶剂体积
质量
1 mg
5 mg
10 mg
1 mM
6.4830 mL
32.4149 mL
64.8298 mL
5 mM
1.2966 mL
6.4830 mL
12.9660 mL
10 mM
0.6483 mL
3.2415 mL
6.4830 mL
查看完整储备液配制表
*
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。储备液的保存方式和期限：-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light, stored under nitrogen)。-80°C储存时，请在6个月内使用，-20°C储存时，请在1个月内使用。
*
备注：如您选择水作为储备液，请稀释至工作液后，再用 0.22 μm 的滤膜过滤除菌后使用。
摩尔计算器
稀释计算器
Mass (g) = Concentration (mol/L) × Volume (L) × Molecular Weight (g/mol)
质量
kg
g
mg
μg
ng
pg
=
浓度
M
mM
μM
nM
pM
×
体积
L
mL
μL
×
分子量 *
Concentration (start) × Volume (start) = Concentration (final) × Volume (final)
This equation is commonly abbreviated as: C1V1 = C2V2
浓度 (start)
M
mM
μM
nM
pM
C1
×
体积 (start)
L
mL
μL
V1
=
浓度 (final)
M
mM
μM
nM
pM
C2
×
体积 (final)
L
mL
μL
V2
In Vivo:
请根据您的 实验动物和给药方式 选择适当的溶解方案。
以下溶解方案都请先按照 In Vitro 方式配制澄清的储备液，再依次添加助溶剂：
——为保证实验结果的可靠性，澄清的储备液可以根据储存条件，适当保存；体内实验的工作液，建议您现用现配，当天使用；
以下溶剂前显示的百分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比；如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过加热和/或超声的方式助溶
方案 一
请依序添加每种溶剂： 10% DMSO 40% PEG300 5% Tween-80 45% SalineSolubility: ≥ 2.5 mg/mL (16.21 mM); 澄清溶液
此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；再向上述体系中加入 50 μL Tween-80，混合均匀；然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。生理盐水的配制：将 0.9 g 氯化钠，溶解于 ddH₂O 并定容至 100 mL，可以得到澄清透明的生理盐水溶液。
方案 二
请依序添加每种溶剂： 10% DMSO 90% (20% SBE-β-CD in Saline)Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (16.21 mM); 澄清溶液
此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中，混合均匀。20% SBE-β-CD in Saline 的配制（4°C，储存一周）：2 g SBE-β-CD（磺丁基醚 β-环糊精）粉末定容于 10 mL 的生理盐水中，完全溶解至澄清透明。
方案 三
请依序添加每种溶剂： 10% DMSO 90% Corn OilSolubility: ≥ 2.5 mg/mL (16.21 mM); 澄清溶液
此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液，此方案实验周期在半个月以上的动物实验酌情使用。以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中，混合均匀。
该产品建议参考如下动物实验溶解方案，可直接配制工作。建议现用现配，在短期内尽快用完。
以下溶剂前显示的百分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比；
如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过加热和/或超声的方式助溶。
方案 一
请依序添加每种溶剂： PBSSolubility: 100 mg/mL (648.30 mM); 澄清溶液; 超声助溶
扫码获得动物溶解方案
动物溶解方案计算器
请输入动物实验的基本信息：
给药剂量 mg/kg
动物的平均体重 g
每只动物的给药体积 μL
动物数量 只
由于实验过程有损耗，建议您多配一只动物的量
计算结果
工作液所需浓度 :
mg/mL
该产品水溶性佳，请具体参考实测 水 / PBS / Saline 中的溶解度数据。
您所需的储备液浓度超过该产品的实测溶解度，如有需要，请与 MCE 中国技术支持联系。
免费服务热线：400-820-3792
E-mail：sales@medchemexpress.cn
技术支持电话：021-58950656
技术支持邮箱：tech@medchemexpress.cn
纯度 & 产品资料
纯度: 98.70%
选择批次：
HY-15917-116339
HY-15917-275793
HY-15917-16205
HY-15917-30099
HY-15917-33360
HY-15917-40976
HY-15917-65667
HY-15917-89474
HY-15917-99028
HY-15917-205097
HY-15917-120223
HY-15917-243412
Data Sheet (620 KB)
SDS (560 KB)
COA (167 KB)
HNMR (228 KB)
LCMS (259 KB)
产品使用指南 (1538 KB)
参考文献
[1]. Dithiothreitol, From Wikipedia
[1]. Dithiothreitol, From Wikipedia
DL-dithiothreitol 相关分类
Others
Biochemical Assay Reagents
完整储备液配制表
*
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。储备液的保存方式和期限：-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (protect from light, stored under nitrogen)。-80°C储存时，请在6个月内使用，-20°C储存时，请在1个月内使用。
可选溶剂
浓度
溶剂体积
质量
1 mg
5 mg
10 mg
25 mg
DMSO / H2O
1 mM
6.4830 mL
32.4149 mL
64.8298 mL
162.0746 mL
5 mM
1.2966 mL
6.4830 mL
12.9660 mL
32.4149 mL
10 mM
0.6483 mL
3.2415 mL
6.4830 mL
16.2075 mL
15 mM
0.4322 mL
2.1610 mL
4.3220 mL
10.8050 mL
20 mM
0.3241 mL
1.6207 mL
3.2415 mL
8.1037 mL
25 mM
0.2593 mL
1.2966 mL
2.5932 mL
6.4830 mL
30 mM
0.2161 mL
1.0805 mL
2.1610 mL
5.4025 mL
40 mM
0.1621 mL
0.8104 mL
1.6207 mL
4.0519 mL
50 mM
0.1297 mL
0.6483 mL
1.2966 mL
3.2415 mL
60 mM
0.1080 mL
0.5402 mL
1.0805 mL
2.7012 mL
80 mM
0.0810 mL
0.4052 mL
0.8104 mL
2.0259 mL
100 mM
0.0648 mL
0.3241 mL
0.6483 mL
1.6207 mL
*
备注：如您选择水作为储备液，请稀释至工作液后，再用 0.22 μm 的滤膜过滤除菌后使用。
Help & FAQs
Do most proteins show cross-species activity?
Species cross-reactivity must be investigated individually for each product. Many human cytokines will produce a nice response in mouse cell lines, and many mouse proteins will show activity on human cells. Other proteins may have a lower specific activity when used in the opposite species.
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DL-dithiothreitol3483-12-3DTTDL-二硫苏糖醇Biochemical Assay ReagentsInhibitorinhibitorinhibit
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一步实现蛋白鉴定中的还原和烷基化_清华大学蛋白质研究技术中心
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一步实现蛋白鉴定中的还原和烷基化
2019/06/21
41584
作者：陈宇凌
图1 溶液内酶解和胶内酶解步骤
基于质谱技术的蛋白质化学平台为用户提供包括常规蛋白质鉴定、蛋白修饰鉴定、蛋白NC端分析、定量蛋白质组学分析、修饰蛋白质组学分析、完整蛋白分子量精确测量以及H/D交换质谱分析等。除后两者外，前几项分析都需要对蛋白进行酶解前处理，将蛋白消化成肽段，以便于质谱测序分析。酶解前一般需要对溶液内或胶内的蛋白进行二硫键还原，并对蛋白中的巯基进行烷基化修饰（图1）。经典的流程中还原和烷基化分两步进行，耗时约1.5小时，是不是可以将这两步操作合并，实现一步还原和烷基化的反应呢？答案当然是肯定的！下面我们就来看看，二硫键还原和烷基化里藏着的小窍门！
酶解前处理一般需要还原蛋白中的二硫键，破坏蛋白结构来加强酶解的效率。常用的还原剂一有二硫苏糖醇（DTT）或三(2-羧乙基)膦（TCEP）。为了阻止还原后的自由巯基再次形成二硫键，我们经常使用烷基化试剂将巯基封闭，常用的烷基化试剂有碘乙酰胺（IAM，iodoacetamide）、氯乙酰氨（ClAM，chloroacetamide）、碘乙酸和N-乙基马来酰亚胺等。
1.二硫键还原剂
DTT是苏糖醇的C-1及C-4位羟基置换成巯基的化合物，如图2所示，常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可阻止蛋白质中的半胱氨酸之间形成蛋白质分子内或分子间二硫键。DTT有两个巯基基团，还原二硫键的作用能维持3-7天，其还原状态下为线性分子，被氧化后变成包含二硫键的六元环状结构。由于质子化的硫的亲核性较低，随着pH值的降低，DTT的还原力也随之降低。
TCEP是一种无色、无味、易溶于水的弱还原性物质，在空气和水溶液中具有较高稳定性。TCEP属于三价膦系衍生物，其还原二硫键的原理是其中心原子P所带的孤电子对能与氧原子形成配位共价结合而具有还原性。TCEP具有很多DTT所不能比拟的好处，其对还原二硫键选择性极强，除半胱氨酸外，几乎没有与其它氨基酸的副反应，最重要的是，能在更宽的pH范围内（可以低至pH3）使用，还原能力强于DTT，作用可维持2-3周。
图2 DTT和TCEP的分子式
从图2的结构中，我们很容易看出，DTT上的巯基也会和烷基化试剂反应，因此为了防止DTT在还原二硫键之前就被烷基化试剂中和，DTT和烷基化试剂不能同时加入到蛋白溶液或者蛋白胶中；但是，TCEP由于还原原理不同于DTT，可同时和烷基化试剂一起加入，并且作用更强更稳定，是一种高效地还原二硫键的DTT替代物。
2.巯基烷基化
巯基具有很强的亲核性，被还原后的巯基一般需要进行烷基化封闭，避免其再次形成二硫键。目前我们最常用的烷基化试剂是碘乙酰胺，但实验和已有文献均表明[1]，碘乙酰胺不但会对半胱氨酸的巯基进行修饰，还能和赖氨酸的残基反应，在赖氨酸上添加分子量为114.0429 Da的修饰，和泛素化酶切后留下的双甘氨酸修饰分子量近似，如图3所示。因此，在鉴定泛素化修饰时，应该避免使用碘乙酰胺对蛋白进行烷基化修饰，以免鉴定出假阳性的泛素化修饰位点。
图3 碘乙酰胺可以在赖氨酸上添加分子量和双甘氨酸标签类似的修饰[1]
将组蛋白使用SILAC标记，轻标组蛋白使用碘乙酰胺修饰，重标组蛋白不使用碘乙酰胺修饰，混合后酶解，可看到肽段VTIAQGGVLPNIQAVLLPK*K (*, 泛素化修饰位点)在HPLC上有两个分子量近似峰，第一个峰在重标和轻标样品中都存在，即泛素化修饰肽段；第二个峰只存在于轻标样品中，即赖氨酸被碘乙酰胺修饰的肽段。
氯乙酰氨，和碘乙酰胺类似，是一种针对半胱氨酸特异性更强的烷基化试剂[2]。已有报道证明，氯乙酰胺能够有效烷基化巯基，并且不产生双甘氨酸类似修饰，如图4所示。
图4 氯乙酰胺不与赖氨酸残基反应
将组蛋白使用SILAC标记，轻标组蛋白使用碘乙酰胺修饰，重标组蛋白使用氯乙酰胺修饰，混合后酶解，可看到肽段VTIAQGGVLPNIQAVLLPK*K (*, 泛素化修饰位点)在HPLC上有两个分子量近似峰，第一个峰在重标和轻标样品中都存在，即泛素化修饰肽段；第二个峰只存在于轻标样品中，即赖氨酸被碘乙酰胺修饰的肽段。
说了这么多，其实操作就很简单了。在进行胶内酶解的二硫键还原和烷基化步骤时，向干燥的蛋白胶粒中加入含有10 mM TCEP和25 mM氯乙酰胺的50 mM碳酸氢铵溶液，避光常温反应30min，蛋白的还原烷基化即可大功告成！
参考文献：
1.Michael Nielsen, Michiel Vermeulen, Tiziana Bonaldi, Jurgen Cox, Luis Moroder and Matthias Mann. Iodoacetamide-induced artifact mimics ubiquitination in mass spectrometry. Nature Methods, 2008, 5: 459-460.
2.Knut H. DAHL and John S. McKINLEY-McKEE. The imidazole-promoted inactivation of horse liver alcohol dehydrogenase. Bioorg. Chem., 1981, 10: 329-341.
本文章版权归清华大学蛋白质研究技术中心蛋白质化学与组学平台所有
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